Un metodo per determinare i limiti di tolleranza di una proteina per la sostituzione dell'amminoacido. Un clonato gene è mutato dalla sintesi di brevi segmenti del gene con sostituzioni di base casuale, inserimento di questi alterati sequenze polinucleotidiche in del gene e quindi la trasformazione delle cellule con il gene mutato. Le celle che contengono una proteina funzionale sono selezionate e le proteine (o gene) è esaminato per identificare la mutazione di successo. Test di molti tali segmenti brevi fino a quando l'intero gene strutturale è esaminati mappe le zone di tolleranza e di sensibilità del prodotto del gene per le sostituzioni.